众立生物SDS-PAGE 实验原理

       众立生物SDS-PAGE实验原理
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立，1969年由Weber和Osborn进一步完善。

        聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称 Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称 Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶， 并以此为支持物进行电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电 荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一 条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
        这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称 SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因 此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE后，就只出现一条蛋白质区带。SDS—PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
      本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH和凝胶孔径等所组成。