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实时荧光定量PCR是什么

来源:http://www.tjzhlbio.com/news/63.html时间:2019-11-11

实时荧光定量PCR是什么?
这是一种可以实时监控核酸扩增的技术,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控,以此实现对初始模板的定量分析,可简称为qPCR或real-time PCR,但绝非RT-PCR,这是逆转录PCR的意思。
相较于常规PCR,借助电泳对扩增反应的终产物进行半定量及定性分析,qPCR利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,精确的对起始模板定量分析。

技术发明史
1992年由日本科学家Higuchi在报告中提出
1996年由美国Applied Biosystems公司推出
技术发展趋势
从单一的染料染色法发展到特异性更高的探针法
从开始的只能检测单一波长光源发展到可以检测多种波长光源
技术原理
首先在PCR扩增反应的数个循环里,荧光信号变化不大,接近一条直线,这样的直线即是基线,这条线是可以自动生成也可以手动设置的。之后反应会进入指数增长期,这个期间扩增曲线具有高度重复性,在该期间,可设定一条荧光阈值线,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般会将荧光阈值的缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍。每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数被称为CT值,这个值与起始浓度的对数成线性关系,且该值具有重现性。

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