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实时荧光PCR仪销售厂家其工作原理是什么

来源:http://www.tjzhlbio.com/news/24.html时间:2019-04-01

       实时荧光PCR仪销售厂家其工作原理是什么

       实时荧光定量PCR(qPCR):其原理及操作步骤与普通PCR是一样的,只在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,之后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。先介绍下PCR原理。

       PCR的工作原理类似于DNA的体内复制过程,是将待扩增的DNA片断和与其两侧互补的寡核苷酸链引物经变性、退火及延伸三步反应的多次循环,使特定的DNA片断在数量上呈指数增加。PCR扩增首先需要一对引物,根据待扩增区域两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物,引物序列将决定扩增片段的特异性和片段长度。反应体系由模板DNA、一对引物、dNTP、耐高温的DNA聚合酶、酶反应缓冲体系及必须的离子等所组成。PCR反应循环的首步为加热变性,使双链模板DNA变性为单链;第二步为复性,每个引物将与互补的DNA序列杂交;第三步为延伸,在耐高温的DNA聚合酶作用下,以变性的单链DNA为模板,从引物3ˊ端开始按5ˊ→3ˊ方向合成DNA链。这样经过一个周期的变性——复性——延伸等三步反应就可以产生倍增的DNA,假设PCR的效率为100%,反复n周期后,理论上就能扩增2n倍。PCR反应一般30-40次循环,DNA片段可放大数百万倍。

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