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变性梯度凝胶电泳的原理是什么

来源:http://www.tjzhlbio.com/news/14.html时间:2019-03-07

      变性梯度凝胶电泳的原理是什么
      变性梯度凝胶电泳是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。

      Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50~60℃,变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值,此区便开始熔解,而高熔点区仍为双链。
      这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变,达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列,即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。因此,DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。
作为一种突变检测技术,DGGE具有如下的优点:

(1)突变检出率高。DGGE 的突变检出率为99%以上。

(2)检测片段长度可达1kb,尤其适用于100~500bp的片段。

(3)非同位素性。DGGE不需同位素掺入,可避免同位素污染及对人体造成的伤害。
(4)操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。
(5)重复性好。但是,该方法需要特殊的仪器,而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。

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