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众立生物DNA 提取过程中的注意事项

来源:http://www.tjzhlbio.com/news/10.html时间:2019-02-21

众立生物DNA 提取过程中的注意事项


(1) 避免试验材料间DNA的交叉污染或外来DNA的污染。使用冷冻干燥叶片法,可以将每个样品在单 独的离心管中研磨,研磨使用的小钢珠球应该是一次性的,如果是反复使用的小钢珠球,必须彻底清洗干净使用液氮和研钵研磨叶片组织时,必须在每次研磨前彻底清理干净研钵和研磨棒。
(2) 试验材料应选取幼嫩组织,因为植物幼嫩组织DNA含量高,且多糖多酚含量少。
(3) 装入离心管的叶片组织不要超过离心管的1/3-1/2,否则会引起细胞裂解不完全,导致产量和纯度下降。
(4) 使用液氮研磨时,要先将研钵用液氮冷却,在加入液氮后,要先将叶片压碎,研磨时要快速用力,尽量使样品磨成粉末状。
(5) 水浴前需要确保试管盖盖严,或使用辅助工具进行加固,以防止水浴时因温度较高导致试管盖开裂。
(6) 水浴过程中,每隔10-15min将离心管取出振荡摇匀,使粉碎的叶片组织尽量与裂解液充分接触,破坏细胞结构,释放DNA。
(7) 实验过程中振荡动作不宜剧烈,移液枪头使用大孔枪头,移液动作不能太快,以免使DNA断裂。
(8) 当DNA以小球状固体沉积在离心管底部后,倾倒离心管中多余液体时,应避免把DNA小球一起倒出可在倒去大部分液体后,改用吸水纸吸取剩余液体。
(9) DNA风干在无菌操作台上进行,待乙醇彻底风干后才能加入TE或ddH2O溶解,如果有残留的乙醇,可能会影响PCR反应的试验结果。
(10) 如果DNA纯度不好,可将粗提物用溶液1×TE充分溶解,离心后,取上清液再次沉淀DNA,可有效除去多糖。

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